Определите цель проверки
Идентичность, чистота и полноразмерность подтверждаются разными методами.
Подтверждение результата
Контроль качества под требования эксперимента
Разные методы подтверждают разные свойства готового олигонуклеотида. Выбирайте контроль по тому, что важно проверить перед использованием.
Изучить параметр
Выбрать в конструкторе
Отправить запрос
Сопоставьте с риском
Чем чувствительнее применение, тем важнее заранее определить необходимый уровень подтверждения.
Смотрите вместе с очисткой
QC не заменяет очистку, а дополняет выбранный производственный маршрут.
Аналитическое подтверждение
Контроль качества отвечает на конкретный вопрос о готовом продукте
Один метод не подтверждает одновременно массу, чистоту, полноразмерность и функциональность метки. Поэтому важно сначала определить, что критично для эксперимента.
Спектрофотометрия используется для количественного измерения с учётом коэффициента экстинкции.
Сравнение с маркерами длин помогает оценить положение целевого продукта.
Аналитическая хроматография показывает распределение основного продукта и примесей.
Масс-спектрометрия подтверждает соответствие измеренной массы ожидаемой конструкции.
Базовый производственный контроль
Что проверяется для стандартного олигонуклеотида
Независимо от выбранной дополнительной опции продукт проходит производственные измерения и контрольные операции.
Внешний вид
Для раствора контролируют прозрачность и отсутствие видимых частиц или осадка.
Количество
УФ-поглощение при 260 нм используется для расчёта ОЕ и концентрации.
Длина и чистота
Гель с маркерами длин позволяет оценить целевой продукт и короткие примеси.
Профиль разделения
По запросу может предоставляться аналитический профиль обращённо-фазовой или ион-парной ВЭЖХ.
Модифицированные олигонуклеотиды
Функциональность метки требует отдельного подтверждения
Наличие нужной молекулярной массы не всегда доказывает, что функциональная группа сохранила требуемое поведение.
Флуоресцентная метка
Целевую полосу контролируют после электрофореза с визуализацией флуоресцентного сигнала под УФ.
Биотин
Используются электрофоретический и колориметрический подходы.
Аминогруппа
Реакционную способность можно подтверждать последующей конъюгацией с биотином.
Фосфатная группа
Применяют гидролиз аликвоты щелочной фосфатазой и электрофоретическое сравнение продуктов.
Как читать результат
Разделяйте идентичность, чистоту и функциональность
Контроль качества дополняет, но не заменяет выбранный метод очистки.
Идентичность
Ожидаемая молекулярная масса и корректное присутствие модификаций.
Чистота
Доля основного продукта относительно укороченных цепей и других примесей.
Полноразмерность
Соответствие длины целевой последовательности.
Функциональность
Способность метки, линкера или другой группы выполнять свою экспериментальную роль.
Практические вопросы
Перед выбором параметров
Масс-спектрометрия показывает чистоту?
Она прежде всего подтверждает массу и состав. Для оценки профиля примесей используют другие методы.
Нужен ли дополнительный QC после очистки?
Это зависит от риска задачи и того, какие свойства необходимо документально подтвердить.
Почему для модификаций отдельные тесты?
Функциональная группа может требовать не только подтверждения присутствия, но и проверки реакционной или оптической активности.
Как выбрать контроль качества
Показываются только активные виды контроля качества из справочника. Очистка и контроль качества являются разными параметрами.
Масс-спектрометрия
Подтверждает молекулярную массу и помогает выявить несоответствие состава.
Когда применять
- Модификации
- Зонды
- Высокая цена ошибки
Когда не выбирать
- Когда нужен только профиль чистоты
Подтверждает массу, но не заменяет оценку чистоты.
Нет
Активный вариант из текущего справочника.
Когда применять
- Когда этот вариант соответствует требованиям вашей задачи
Когда не выбирать
- Если требования эксперимента предполагают другой метод
Точные ограничения и условия уточняйте по описанию справочника и в редакторе заказа.
Доступные варианты контроля качества
Следующий шаг
Добавьте нужный контроль к последовательности
Конструктор покажет доступные методы и учтёт их в предварительном расчёте.