Выявление ДНК возбудителя индийской (карнальской) головни пшеницы с помощью набора реагентов «Tilletia indica-РВ»

Набор реагентов «Tilletia indica-РВ»

Tilletia indica Mitra 1931 — фитопатогенный гриб, возбудитель индийской (карнальской) головни пшеницы. Основным растением-хозяином является пшеница, кроме того, патоген способен поражать такие культуры, как тритикале и рожь.

Первый случай индийской головни был официально зарегистрирован в 1931 г. на опытных полях Индиийского института сельскохозяйственных исследований (окрестности г. Карнал). До 1974–1975 г. болезнь была ограничена только несколькими районами Индии, но использование заражённых семян привело к распространению в такие страны, как Иран, Ирак, Афганистан, Непал, Пакистан, Южная Африка, Мексика, США.

Заражение T. indica не всегда приводит к значительным потерям урожая, но ухудшение качества зерна существенно сказывается на международной торговле пшеницей. Основной путь распространения индийской головни — заражённые семена, при этом телиоспоры патогена способны годами сохраняться в почве и распространяться на большие расстояния с ветром.

Характерным признаком для индийской головни пшеницы является наличие в колосе зерен, заполненных черными споровыми массами — головнёвыми сорусами. Также у заражённых T. indica растений может отмечаться задержка роста (карликовость). Выявить индийскую головню при визуальном осмотре поля крайне сложно, поскольку при малой интенсивности заражения симптомы могут оставаться незамеченными до конца вегетационного периода. Интенсивность проявления симптомов у заражённых T. indica растений связана с наличием благоприятных для патогена климатических условий: температурой 8–22 °С и высокой влажностью.

T. indica входит в список Карантинных вредных организмов, отсутствующих на территории Евразийского экономического союза.

«Tilletia indica-РВ»

Набор реагентов для выявления ДНК возбудителя индийской (карнальской) головни пшеницы методом полимеразной цепной реакции в реальном времени.

Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала, в целях обнаружения Tilletia indica. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце ДНК Tilletia indica.

Набор реагентов «Tilletia indica-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный фрагмент ДНК Tilletia indica — по каналу флуоресценции FAM/Green, а также внутренний положительный контроль (ВПК) — по каналу флуоресценции Cy5/Red. Реакция ВПК необходима для исключения ложноотрицательных результатов.

• Чувствительность
  Чувствительность ПЦР при использовании набора реагентов «Tilletia indica-РВ» — не менее 1,0*10³ копий ДНК в миллилитре пробы.
• Специфичность
  Ложноотрицательные результаты при анализе образцов, содержащих ДНК целевого объекта, отсутствовали. Ложноположительные результаты при анализе образцов ДНК, не содержащих вышеперечисленные специфические фрагменты, отсутствовали.

Набор реагентов апробирован на следующих приборах: «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), «CFX96» («BioRad», США), «Rotor Gene» (Qiagen), «DT» («ДНК-технология», Россия), QuantStudio 5 (Thermo Fisher Scientific, США), Gentier 96Е (Tianlong, Китай).

Примеры анализа на выявление ДНК возбудителя индийской (карнальской) головни пшеницы с использованием набора реагентов «Tilletia indica-РВ» на приборах для ПЦР в реальном времени: