Выявление ДНК возбудителя карликовой головни пшеницы с помощью набора реагентов «Tilletia controversa-РВ»

Набор реагентов «Tilletia controversa-РВ»

Карликовая головня пшеницы, вызываемая грибами вида Tilletia controversa J.G. Kühn, — серьёзное заболевание, способное привести к существенному снижению урожая и значительному ухудшению качества зерна. Прикрепившиеся к зернам споры, попадая в почву, могут сохраняться в ней, длительное время оставаясь жизнеспособными, что приводит к заражению патогеном молодых проростков.

Основным растением-хозяином T. controversa является пшеница, кроме того, фитопатоген способен поражать и другие растения семейства злаковые: Aegilops geniculata, Alopecurus myosuroides, Arrhenatherum elatius, Bromus inermis, Dactylis glomerata, Elymus repens, Festuca, Hordeum vulgare, Lolium, Poa pratensis, Secale cereale.

Идентификация патогена затруднена, поскольку проявление симптомов у заражённых растений сильно варьируется. Неизменными остаются только длительный инкубационный период и низкая температура, необходимая для прорастания телиоспор. Ввиду сильного сходства T. controversa с близкородственным видом Tilletia caries идентификация по морфологии спор почти невозможна (CABI Compendium, EPPO Global Database).

T. controversaвходит в список Карантинных вредных организмов, ограниченно распространённых на территории Евразийского экономического союза.

«Tilletia controversa-РВ»

Набор реагентов для выявления ДНК возбудителя карликовой головни пшеницы методом полимеразной цепной реакции в реальном времени.

Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала, в целях обнаружения Tilletia controversa. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце ДНК Tilletia controversa.

Набор реагентов «Tilletia controversa-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный фрагмент ДНК Tilletia controversa — по каналу флуоресценции FAM/Green, а также внутренний положительный контроль (ВПК) — по каналу флуоресценции R6G/HEX/Yellow/VIС. Реакция ВПК необходима для исключения ложноотрицательных результатов.

• Чувствительность
  Чувствительность ПЦР при использовании набора реагентов «Tilletia controversa-РВ» — не менее 2,0*10³ копий ДНК в миллилитре пробы.
• Специфичность
  Ложноотрицательные результаты при анализе образцов, содержащих ДНК Tilletia controversa, отсутствовали. Ложноположительные результаты при анализе образцов, не содержащих специфические фрагменты ДНК Tilletia controversa, отсутствовали.

Набор реагентов апробирован на следующих приборах: «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), «CFX96» («BioRad», США), «Rotor Gene» (Qiagen), «DT» («ДНК-технология», Россия), QuantStudio 5 (Thermo Fisher Scientific, США), Gentier 96Е (Tianlong, Китай).

Примеры анализа на выявление ДНК возбудителя карликовой головни пшеницы с использованием набора реагентов «Tilletia controversa-РВ» на приборах для ПЦР в реальном времени: