Выявление ДНК возбудителя жёлтой болезни гиацинтов с помощью набора реагентов «Xanthomonas hyacinthi-РВ»

Набор реагентов «Xanthomonas hyacinthi-РВ»

Xanthomonas hyacinthi(Wakker) Dowson — возбудитель жёлтой болезни гиацинтов и связанных с ними декоративных луковичных культур.

Основным растением-хозяином является гиацинт восточный (Hyacinthus orientalis). Первые симптомы при инфицировании растений в условиях открытого грунта — отсутствие всходов, замедление роста, внезапное увядание. На заражённых патогеном гиацинтах наблюдаются продольные водянистые полосы, тянущиеся от луковицы к надземной части растения. На листьях часто формируются небольшие темно-зелёные круглые или овальные пятна, главным образом на кончиках и краях листовой пластины, которые позднее распространяются по всей поверхности. По мере прогрессирования инфекции края листа приобретают тёмно-коричневый цвет.

В прикорневой части инфицированной луковицы появляются жёлтые пятна, которые по мере прогрессирования болезни стремительно распространяются. Инфекция двигается вверх по сосудам ксилемы чешуек луковицы, заполняя их бактериальной слизью.

При проникновении бактерий через внешние повреждения луковицы покрываются мелкими пятнами неправильной формы, цвет которых варьируется от жёлтого до тёмно-коричневого. На этапе хранения инфекция продолжает распространяться, приводя к иссыханию луковицы. X. hyacinthi легко распространяется в открытом грунте с ветром и дождём, а также при механическом повреждении инфицированных луковиц. Сельскохозяйственная техника и инструменты, используемые для сбора и сортировки луковиц, также способствуют переносу патогена.

В настоящее время возбудитель жёлтой болезни гиацинтов распространен в странах Америки, Азии, Европы и Океании. X. hyacinthi входит в список карантинных вредных организмов, отсутствующих на территории Евразийского экономического союза.

«Xanthomonas hyacinthi-РВ»

Набор реагентов для выявления ДНК возбудителя жёлтой болезни гиацинтов методом полимеразной цепной реакции в реальном времени

Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала, в целях обнаружения Xanthomonas hyacinthi. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце ДНК Xanthomonas hyacinthi.

Набор реагентов «Xanthomonas hyacinthi-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфический фрагмент ДНК Xanthomonas hyacinthi — по каналу флуоресценции ROX/Orange, а также внутренний положительный контроль (ВПК) — по каналу флуоресценции HEX/Yellow/VIC. Реакция ВПК необходима для исключения ложноотрицательных результатов.

• Чувствительность
  Чувствительность ПЦР при использовании набора реагентов «Xanthomonas hyacinthi-РВ» — не менее 1,0*10³ копий ДНК в миллилитре пробы.
• Специфичность
  Ложноотрицательные результаты при анализе образцов, содержащих ДНК Xanthomonas hyacinthi, отсутствовали. Ложноположительные результаты при анализе образцов, не содержащих специфические фрагменты ДНК Xanthomonas hyacinthi, отсутствовали.

Набор реагентов апробирован на следующих приборах: «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), «CFX96» («BioRad», США), «Rotor Gene» (Qiagen), «DT» («ДНК-технология», Россия), QuantStudio 5 (Thermo Fisher Scientific, США), Gentier 96Е (Tianlong, Китай).

Примеры анализа на выявление ДНК возбудителя жёлтой болезни гиацинтов с использованием набора реагентов «Xanthomonas hyacinthi-РВ» на приборах для ПЦР в реальном времени: