Выявление ДНК возбудителя белой ржавчины хризантем с помощью набора реагентов «Puccinia horiana-РВ»

Набор реагентов «Puccinia horiana-РВ»

Puccinia horiana Henn. 1901 — возбудитель белой ржавчины хризантем. Это микроциклический ржавчинный гриб, поражающий растения рода Chrysanthemum. Впервые белая ржавчина хризантем была обнаружена в Японии в 1895 году, и до 1960-х годов её распространение было ограничено территориями Японии и Китая. На сегодняшний день патоген распространён на территории Африки, Америки, Азии, Европы, Австралии и Океании. Puccinia horiana входит в перечень карантинных объектов, ограниченно распространённых на территории Евразийского экономического союза.

Puccinia horiana прежде всего поражает молодые листья. Первые симптомы инфекции характеризуются появлением на листьях светло-зелёных или светло-жёлтых пятен. По мере прогрессирования инфекции эти пятна постепенно разрастаются и приобретают светло-жёлтую окраску с бурым центром. При сильном заражении листья закручиваются вниз и преждевременно отмирают. Возбудитель болезни может распространяться системно и сохраняться в корнях зимующих растений. Основными путями распространения являются заражённые растения, также перенос патогена на расстояния возможен за счёт ветра и насекомых. В условиях высокой влажности и при диапазоне температур 17–24 °С инкубационный период составляет около 7–10 дней.

«Puccinia horiana-РВ»

Набор реагентов для выявления ДНК возбудителя белой ржавчины хризантем методом полимеразной цепной реакции в реальном времени

Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала, в целях обнаружения Puccinia horiana. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце ДНК Puccinia horiana.

Набор реагентов «Puccinia horiana-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный для белой ржавчины хризантем фрагмент гена (по каналу флуоресценции FAM/Green), а также внутренний положительный контроль (ВПК) — по каналу флуоресценции Cy5/Red.

• Чувствительность
  Чувствительность ПЦР при использовании набора реагентов «Puccinia horiana-РВ» — не менее 2,0*10³ копий ДНК в миллилитре пробы.
• Специфичность
  Ложноотрицательные результаты при анализе образцов, содержащих ДНК Puccinia horiana, отсутствовали. Ложноположительные результаты при анализе образцов, не содержащих специфические фрагменты ДНК Puccinia horiana, отсутствовали.

Набор реагентов апробирован на следующих приборах: «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), «CFX96» («BioRad», США), «Rotor Gene» (Qiagen), «DT» («ДНК-технология», Россия), QuantStudio 5 (Thermo Fisher Scientific, США), Gentier 96Е (Tianlong, Китай).

Примеры анализа на выявление ДНК возбудителя белой ржавчины хризантем с использованием набора реагентов «Puccinia horiana-РВ» на приборах для ПЦР в реальном времени: