Выявление ДНК бегомовирусов, возбудителей болезни жёлтой курчавости листьев томата с помощью набора реагентов «Tomato yellow leaf curl disease-РВ»

Набор реагентов «Tomato yellow leaf curl disease-РВ»

Болезнь жёлтой курчавости листьев томата (TYLCD) является одним из самых распространенных заболеваний томата. Возбудителями болезни является комплекс из шести видов вируса рода Begomovirus. Бегомовирусы могут поражать не только томат, но и такие культуры, как фасоль, перец, тыква, петуния, табак. Вирус жёлтой курчавости листьев томата (TYLCV) является наиболее изученным и самым распространённым среди остальных видов. Помимо TYLCV комплекс TYLCD включает в себя такие виды, как: вирус жёлтой курчавости листьев томата — Судана (TYLCSDV), вирус жёлтой курчавости листьев томата — Ахаркия (TYLCAxV), вирус жёлтой курчавости листьев томата — Малаги (TYLCMLV), вирус жёлтой курчавости листьев томата — Мали (TYLCMLV), вирус жёлтой курчавости листьев томата — Сардинии (TYLCSV).

Вирус жёлтой курчавости листьев томата не передаётся семенами и механическим путём, главным переносчиком является табачная белокрылка (Bemisia tabaci). При заражении растений на стадии рассады вирус вызывает сильное отставание в развитии молодых листьев и побегов, что приводит к некоторой кустистости растения. У более старых растений заболевание приводит к чрезмерной кустистости, утолщённым и сморщенным листьям, межжилковому хлорозу. На более поздних стадиях заболевания листья приобретают жёсткую текстуру, и их хлоротические края закручиваются кверху и внутрь.

На сегодняшний день вирус жёлтой курчавости листьев томата и родственные ему вирусы включены в список А2 ЕОКЗР и в первый список единого перечня карантинных объектов Евразийского экономического союза.

«Tomato yellow leaf curl disease-РВ»

Набор реагентов для выявления ДНК бегомовирусов, возбудителей болезни жёлтой курчавости листьев томата, методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ)

Набор реагентов «Tomato yellow leaf curl disease-РВ» предназначен для обнаружения ДНК бегомовирусов, возбудителей болезни жёлтой курчавости листьев томата.

Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль карантинного фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала, в целях обнаружения ДНК возбудителей болезни жёлтой курчавости листьев томата. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце ДНК бегомовирусов, возбудителей болезни жёлтой курчавости листьев томата.

Набор реагентов «Tomato yellow leaf curl disease-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный для Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) фрагмент гена (по каналу флуоресценции FAM/Green) и специфичный для Tomato yellow leaf curl Axarquia virus (TYLCAxV), Tomato yellow leaf curl Malaga virus (TYLCMLV), Tomato yellow leaf curl Sardinia virus (TYLCSV) фрагмент гена (по каналу флуоресценции ROX/Orange), а также внутренний положительный контроль (ВПК) — по каналу флуоресценции R6G/HEX. Реакция ВПК необходима для исключения ложноотрицательных результатов.

• Специфичность
  При проверке на специфичность использовались ДНК и РНК близкородственных, сопутствующих и целевых штаммов бактерий, грибов и вирусов следующих коллекций: DSMZ, Федерального государственного бюджетного учреждения «Всероссийский центр карантина растений» (ФГБУ «ВНИИКР»).
  
  Ложноотрицательные результаты при анализе образцов растений, содержащих ДНК и РНК близкородственных, сопутствующих и целевых штаммов бактерий, грибов и вирусов, отсутствовали. Ложноположительные результаты при анализе образцов ДНК растений, бактерий, грибов и РНК вирусов, не содержащих вышеперечисленные специфические фрагменты, отсутствовали.

Набор реагентов апробирован на следующих приборах: «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), «CFX-96» («BioRad», США), «Rotor Gene Q/6000» (Qiagen/Corbett, США/Австралия), «DT» («ДНК-технология», Россия)

Примеры анализа на выявление ДНК бегомовирусов, возбудителей болезни жёлтой курчавости листьев томата с использованием набора реагентов «Tomato yellow leaf curl disease-РВ» на приборах для ПЦР в реальном времени: