Выявление ДНК возбудителя бактериального рака томата с помощью набора реагентов «Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis-РВ»

Набор реагентов «Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis-РВ»

Бактерии Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis — возбудители бактериального рака томата. Они паразитируют в основном на растениях томата, однако естественные инфекции были также обнаружены на стручковом перце, баклажане и на некоторых других представителях рода Solanum. Datura stramonium, Chenopodium album и Amaranthus retroflexus являются резервуарами для выживания и дальнейшего распространения бактерий.

Заболевание, вызываемое этими бактериями, проявляется в виде увядания и некрозов на стеблях, листьях и плодах во время цветения растений. Увядание начинается с нижних ярусов листьев. Края таких листьев желтеют и скручиваются. Бактериоз проявляется в виде коричневых язвочек (из них может выступать жёлтая слизь), на молодых чашелистиках, стеблях, черешках и особенно на плодоножках. На поперечном разрезе этих поражённых органов отмечают побурение пучков сосудистой системы. На плодах томата появляются белые пятна (позднее они желтеют).

Первичная инфекция разносится семенами, заражёнными растительными остатками, и передаётся через почву. Вторичная инфекция распространяется в условиях повышенной влажности воздуха через механические повреждения. В загущенных посадках — через волоски листьев. В течение вегетационного периода бактерии распространяются насекомыми, дождевой и поливной водой, орудиями труда при уходе за растениями.

Clavibacter michiganensis subsp. michiganensisшироко распространены на территории России, США, Канады, во многих странах Европы, Южной Африки, Австралии.

На сегодняшний день возбудитель бактериального рака томата включен в список А2 ЕОКЗР.

«Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis-РВ»

Набор реагентов для выявления ДНК возбудителя бактериального рака томата методом полимеразной цепной реакции в реальном времени

Набор реагентов «Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis-РВ» предназначен для обнаружения ДНК Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis — возбудителя бактериального рака томата.

Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль карантинного фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала, в целях обнаружения ДНК Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце ДНК Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis.

Диагностика растений с помощью набора «Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis-РВ» возможна на всех этапах его вегетационного развития методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ).

Набор реагентов «Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный фрагмент ДНК Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis — по каналу флуоресценции ROX/Orange, а также внутренний положительный контроль (ВПК) — по каналу флуоресценции Cy5/Red. Реакция ВПК необходима для исключения ложноотрицательных результатов.

• Специфичность
  Ложноотрицательные результаты при анализе образцов растений, содержащих ДНК Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, отсутствовали. Ложноположительные результаты при анализе образцов ДНК растений и ДНК бактерий, не содержащих Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis, отсутствовали.

Набор реагентов апробирован на следующих приборах: «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), «CFX-96» («BioRad», США), «Rotor Gene Q/6000» (Qiagen/Corbett, США/Австралия), «DT» («ДНК-технология», Россия)

Примеры анализа на выявление ДНК возбудителя бактериального рака томата с использованием набора реагентов «Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis-РВ» на приборах для ПЦР в реальном времени: