Выявление ДНК Bipolaris zeicola с помощью набора реагентов «Bipolaris zeicola-РВ»

Набор реагентов «Bipolaris zeicola-РВ»

Bipolaris zeicola (Stout) Shoemaker – (анаморфа гриба Cochliobolus carbonum R.R.Nelson) возбудитель пятнистости листьев кукурузы. Входит в первый список Единого перечня карантинных объектов Евразийского экономического союза.

B. zeicola поражает растения семейства Злаковые, такие как кукуруза, рис и ячмень и др. Основной путь распространения инфекции – зараженные семена. На основе вырабатываемых токсинов, внешнего вида и размера поражений были выделены 3 патогенные расы B. zeicola. Для расы 1 характерны сухие круглые или овальные поражения коричневого цвета, края которых могут быть светлыми или пурпурными. На растениях, инфицированных расой 2 отмечаются менее многочисленные поражения овальной или неправильной формы. Раса 3 отличается узкими продолговатыми пятнами (Cipollone et al., 2020.; EPPO).

По данным ЕОКЗР патоген широко распространен а странах Африки, Азии ( Индия, Китай), в некоторых европейских странах (Австрия, Хорватия; Италия, Франция, Греция, Сербия – ограниченное распространение) и на территории Океании (Австралия, Новая Зеландия, Соломоновы острова).

«Bipolaris zeicola-РВ»

Набор реагентов для выявления ДНК Bipolaris zeicola методом полимеразной цепной реакции в реальном времени

Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала в целях обнаружения Bipolaris zeicola. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце ДНК Bipolaris zeicola.

Набор реагентов «Bipolaris zeicola-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный фрагмент ДНК Bipolaris zeicola – по каналу флуоресценции FAM/Green, а также внутренний положительный контроль (ВПК) – по каналу флуоресценции R6G/HEX/Yellow/VIC. Реакция ВПК необходима для исключения ложноотрицательных результатов.

• Чувствительность
  Чувствительность ПЦР при использовании набора реагентов «Bipolaris zeicola-РВ» — не менее 1,0*10³ копий ДНК в миллилитре пробы.
• Специфичность
  Специфичность – ложноотрицательные результаты при анализе образцов, содержащих ДНК целевого объекта, отсутствовали, ложноположительные результаты при анализе образцов ДНК, не содержащих вышеперечисленные специфические фрагменты, отсутствовали.

Набор реагентов апробирован на следующих приборах: Gentier 96Е (Tianlong, Китай), QuantStudio 5 (Thermo Fisher Scientific, США), «CFX96» («BioRad», США), «Rotor Gene» (Qiagen), «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия)