Выявление РНК Potato yellowing alfamovirus с помощью набора реагентов «Potato yellowing alfamovirus-РВ»

Альфамовирус пожелтения картофеля (PYV) – палочковидный вирус семейства Bromoviridae. Размер вирусных частиц варьируется от 21 до 368 нм. Поражает картофель и дикие виды рода Solanum. Искусственно зараженными PYV могут быть следующие виды: Сapsicum annuum, Datura metel, D. stramonium, Nicotiana rustica, Lycopersicon esculentum, L. pimpinellifolium, Nicandra physalodes, N. benthamiana и Physalis floridana.

Проявление симптомов у зараженного картофеля может варьироваться в зависимости от сорта. Для одних растений характерно бессимптомное заражение, другие реагируют пожелтением листьев и некрозами. Основным локальным переносчиком PYV является тля, а распространение вируса на большие расстояния происходит с зараженными клубнями картофеля.

Вирус пожелтения картофеля относится к карантинным объектам, отсутствующим на территории Российской Федерации и включен в карантинный список А1 ЕОКЗР.

Набор реагентов для выявления РНК Potato yellowing alfamovirus методом полимеразной цепной реакции в реальном времени совмещённой с реакцией обратной транскрипции (ОТ-ПЦР-РВ).

Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала в целях обнаружения Potato yellowing alfamovirus. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце РНК Potato yellowing alfamovirus.

Набор реагентов «Potato yellowing alfamovirus-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный фрагмент РНК Potato yellowing alfamovirus по каналу флуоресценции FAM/Green, а также внутренний положительный контроль (ВПК) – по каналу флуоресценции R6G/HEX/Yellow/VIC. Реакция ВПК необходима для исключения ложноотрицательных результатов.

• Чувствительность
  Чувствительность ПЦР при использовании набора реагентов «Potato yellowing alfamovirus-РВ» — не менее 1,0*10³ копий кДНК в миллилитре пробы.
• Специфичность
  Специфичность – ложноотрицательные результаты при анализе образцов, содержащих РНК целевого объекта, отсутствовали, ложноположительные результаты при анализе образцов РНК, не содержащих вышеперечисленные специфические фрагменты, отсутствовали.

Набор реагентов апробирован на следующих приборах: Gentier 96Е (Tianlong, Китай), QuantStudio 5 (Thermo Fisher Scientific, США), «CFX96» («BioRad», США), «DT» («ДНК-технология», Россия), «Rotor Gene» (Qiagen), «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия)