Выявление РНК вироида латентной мозаики персика с помощью набора реагентов «Peach latent mosaic viroid-РВ»

Вироид латентной мозаики персика (Pelamoviroid latenspruni, Peach latent mosaic viroid, PLMVd) – широко распространенный патоген, заражение которым приводит к значительным экономическим потерям во всем мире. Данный вироид впервые был изучен и описан во Франции при исследовании образцов, привезенных из Соединенных Штатов и Японии (Desvignes, 1976).

Свое название (вироид латентной мозаики персика) получил ввиду длительного периода от заражения до первого появления внешних признаков. К основным симптомам можно отнести деформацию плодов, мозаичность листьев, полосатость цветов, задержки цветения и созревания плодов, увеличение косточек, некроз почек, увядание и сокращение продолжительности жизни деревьев. Для некоторых изолятов были характерны пожелтение листьев или их обесцвечивание (Flores et al., 2006).

Основными растениями-хозяевами по данным ЕОКЗР являются персик обыкновенный, абрикос обыкновенный, абрикос японский, айва, черешня, слива домашняя, слива китайская, миндаль, груша обыкновенная, груша миндалевидная. Кроме того, в качестве возможных растений-хозяев упоминаются манго и виноград (Pelamoviroid latenspruni // EPPO Global Database). PLMVd включен в первый список единого перечня карантинных объектов Евразийского экономического союза.

«Peach latent mosaic viroid-РВ»

Набор реагентов для выявления РНК вироида латентной мозаики персика методом полимеразной цепной реакции в реальном времени, совмещённой с реакцией обратной транскрипции (ОТ-ПЦР-РВ)

Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала в целях обнаружения Peach latent mosaic viroid. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце РНК Peach latent mosaic viroid.

Набор реагентов «Peach latent mosaic viroid-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный фрагмент РНК Peach latent mosaic viroid — по каналу флуоресценции FAM/Green, а также внутренний положительный контроль (ВПК) — по каналу флуоресценции R6G/HEX/Yellow/VIС. Реакция ВПК необходима для исключения ложноотрицательных результатов.

• Чувствительность
  Чувствительность ПЦР при использовании набора реагентов «Peach latent mosaic viroid-РВ» — не менее 1,0*10³ копий кДНК в миллилитре пробы.
• Специфичность
  Ложноотрицательные результаты при анализе образцов растений, содержащих РНК вирусов, отсутствовали. Ложноположительные результаты при анализе образцов ДНК растений и РНК вирусов, не содержащих специфические фрагменты РНК Peach latent mosaic viroid, отсутствовали.

Набор реагентов апробирован на следующих приборах: QuantStudio 5 (Thermo Fisher Scientific, США), «CFX96» («BioRad», США), «DT» («ДНК-технология», Россия), «Rotor Gene» (Qiagen), «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия)

Примеры анализа на выявление РНК вироида латентной мозаики персика с использованием набора реагентов «Peach latent mosaic viroid-РВ» на приборах для ПЦР в реальном времени: