Выявление РНК вируса полосатой мозаики пшеницы с помощью набора реагентов «Wheat streak mosaic virus-РВ»

Набор реагентов «Wheat streak mosaic virus-РВ»

Вирус полосатой мозаики пшеницы (Wheat streak mosaic virus, WSMV) впервые выявлен в 1937 году (McKinney, 1937). Первоначально был частью рода Rymovirus, после 1998 года из-за различий в структуре белка оболочки был отнесён к роду Tritimovirus, семейство Potyviridae (Stenger et al., 1998).

Вирус полосатой мозаики пшеницы — серьёзное вирусное заболевание, поражающее как озимую, так и яровую пшеницу. Вирус имеет высокое фитосанитарное и экономическое значение. В зависимости от условий окружающей среды потери урожая варьируются от незначительных до полной гибели посевов. WSMV встречается во всех регионах мира, где выращивают пшеницу: Канада, США, Мексика, Европа, Китай, Иран, Иордания, Казахстан, Сирия, Турция, Узбекистан и Австралия.

Существует два основных пути распространения вируса: заражённые семена, из которых вырастают инфицированные растения, и векторы. Главным образом вирус распространяется именно векторами — скручивающими клещами (Aceria tosichella и Aceria tulipae). Основным растением-хозяином для скручивающих клещей и WSMV является пшеница, но они обнаруживаются и на других культурных растениях, таких как кукуруза (Zea mays), ячмень (Hordeum vulgare), рожь (Secale cereale) и сорго (Sorghum bicolor), также встречаются на некоторых диких травах: Stipa spp., Aegilops spp., Setaria spp., Digitaria spp., Lolium spp., Bromus spp., Eriochloa spp.. Наибольшую опасность вирус полосатой мозаики пшеницы представляет для районов, где растения-хозяева растут круглый год.

Первые инфицированные растения чаще всего появляются на краю поля, когда клещи мигрируют с травянистых участков и культур, произрастающих по соседству. Начальный этап заражения характеризуется появлением мелких параллельных хлоротичных полос на поверхности листьев. По мере развития болезни симптомы прогрессируют: полосы удлиняются, образуя прерывистые жёлтые или бледно-зелёные линии, формирующие мозаичный узор на листьях. При более тяжёлых формах инфекции линии сливаются, образуя большие хлоротичные участки, развивающиеся в некроз ткани листа и приводящие к гибели растения.

«Wheat streak mosaic virus-РВ»

Набор реагентов предназначен для выявления РНК вируса полосатой мозаики пшеницы методом полимеразной цепной реакции в реальном времени, совмещённой с реакцией обратной транскрипции (ОТ-ПЦР-РВ)

Диагностика растений на наличие вируса с помощью набора «Wheat streak mosaic virus-РВ» возможна на всех этапах его вегетационного развития методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ).

Набор может быть использован в лабораторных центрах и институтах, проводящих контроль карантинного фитосанитарного состояния растений, в том числе посадочного материала, в целях обнаружения РНК вируса полосатой мозаики пшеницы. Набор позволяет качественно определить, содержится ли в образце РНК Wheat streak mosaic virus.

Проведение реакции обратной транскрипции и последующей мультиплексной ПЦР-РВ в наборе реагентов «Wheat streak mosaic virus-РВ» осуществляется последовательно в одной пробирке в течение одного запуска амплификатора без каких-либо дополнительных манипуляций. Набор реагентов «Wheat streak mosaic virus-РВ» позволяет одновременно выявлять в одной реакционной смеси специфичный фрагмент Wheat streak mosaic virus — по каналу флуоресценции FAM/Green, а также внутренний положительный контроль (ВПК) — по каналу флуоресценции R6G/HEX/Yellow.

Первая реакция позволяет обнаружить последовательность специфического фрагмента РНК вируса полосатой мозаики пшеницы. Реакция ВПК необходима для исключения ложноотрицательных результатов.

• Специфичность
  Ложноотрицательные результаты при анализе образцов растений, содержащих РНК WSMV, отсутствовали. Ложноположительные результаты при анализе образцов ДНК растений и РНК вирусов, не содержащих специфические фрагменты РНК WSMV, отсутствовали.

Набор реагентов апробирован на следующих приборах: «АНК-32 (32М, 48)» (ИАП РАН, г. Санкт-Петербург, Россия), «CFX96» («BioRad», США), «Rotor Gene» (Qiagen), «DT» («ДНК-технология», Россия), QuantStudio 5 (Thermo Fisher Scientific, США).

Примеры анализа на выявление РНК вируса полосатой мозаики пшеницы с использованием набора реагентов «Wheat streak mosaic virus-РВ» на приборах для ПЦР в реальном времени: