Выберите функцию
Начните с того, какую роль должна выполнять модификация в эксперименте.
Функциональная конструкция
Метки, гасители, линкеры и другие группы задают функциональность олигонуклеотида. Перед выбором проверьте назначение, позицию и совместимость.
Начните с того, какую роль должна выполнять модификация в эксперименте.
Не каждая группа доступна одновременно на 5′-, 3′- и внутренней позиции.
Цена зависит от выбранной модификации и фасовки продукта.
Функциональные группы
Позиция, способ введения, очистка и обозначение в sequence так же важны, как название группы. Каталог ниже показывает реальные символы и допустимые положения.
Часто используется для меток, фосфатов, линкеров и защитных групп.
Может задавать метку, гаситель, блокирование удлинения или связь с носителем.
Обычно требует специального модифицированного основания или линкера.
Для очищенных флуоресцентно-меченых конструкций заявляется чистота не менее 95%.
Основные классы
Разные классы модификаций меняют оптические, химические или биологические свойства олигонуклеотида.
Используются для детекции. Могут располагаться на 5′-, 3′-конце или внутри цепи при наличии подходящей химии.
Поглощают энергию флуорофора и используются в зондах; рабочий диапазон должен перекрывать эмиссию красителя.
Обеспечивает высокоаффинное связывание с авидином и стрептавидином для иммобилизации и детекции.
Создают реакционноспособную группу для постсинтетической конъюгации; доступны на концах и во внутренней позиции.
Задают расстояние между участками, заменяют неопределённый фрагмент или отделяют метку от последовательности.
Повышают устойчивость к нуклеазам и применяются в антисенсовых и других задачах, требующих защиты цепи.
Флуоресцентные метки
Краситель может вводиться непосредственно при синтезе, через модифицированную подложку CPG или постсинтетически через аминолинкер.
Позволяет встроить метку по протоколу твёрдофазного синтеза в допустимую позицию.
Используется для некоторых 3′-концевых красителей.
Активированное производное красителя реагирует с аминолинкером; такой маршрут требует дополнительной очистки.
Часто требует модифицированного dT-линкера и отдельного символьного кода.
Очистка и контроль
Для флуоресцентных конструкций применяется многостадийное разделение, затем подтверждаются оптические свойства и полноразмерность.
Гель-фильтрация удаляет свободный краситель и соли.
ВЭЖХ или ПААГ отделяют меченый олигонуклеотид от непрореагировавшей цепи.
Спектр помогает подтвердить вклад красителя и нуклеотидной части.
Для ряда флуоресцеин-меченых продуктов используется дополнительный контроль разделения.
Практические вопросы
Публичное название описывает химическую группу, а технический symbol кодирует конкретную позицию и способ записи в последовательности.
Нет. Допустимые 5′-, 3′- и внутренние положения зависят от конкретной химии и отражены в справочнике.
Они требуют модифицированного основания или линкера и могут добавлять отдельные стадии синтеза и очистки.
Выберите группу, найдите модификацию по символу или названию и сравните ориентировочную стоимость для доступных фасовок.
Модификация важна не только сама по себе, но и тем, где она может стоять в последовательности. Перед заказом проверьте расположение, спектральные параметры и совместимость с очисткой.
Чаще используется для флуорофоров, биотина, фосфатных и других терминальных меток.
Обычно подходит для гасителей, блокирующих групп и терминальных модификаций зонда.
Подходит для dT/dC-модификаций и конструкций, где метка должна быть внутри цепи.
Для зондов сравнивайте λem красителя с диапазоном гашения, а не только названия.
применение: гасители
| № | Симв. код | Название | Расположение | Экстинкция | Молек. масса | Цена ? |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Гасители флуоресценции | ||||||
| 1 |
5'-RTQ1RTQ1 гаситель |
амедит RTQ1 на 5'-конец— Пример 5′: 5'-RTQ1/ACGTACGT |
5′ | 8 | 658 |
—
|
| 2 |
BHQ1BHQ1 гаситель |
Black Hole Quencher-1<p>With the growing popularity of red and near-infrared dyes, we are offering the Black Hole QuencherTM dyes (BHQs). BHQ dyes are robust dark quenchers that very nicely complement our existing product line. They ar… Пример 5′: BHQ1/ACGTACGT |
5′/3′ | 8 | 569 |
от 98 ₽
|
| 3 |
BHQ2BHQ2 гаситель |
Black Hole Quencher-2— Пример 5′: BHQ2/ACGTACGT |
5′/3′ | 8 | 571 |
от 98 ₽
|
| 4 |
BHQ3BHQ3 гаситель |
Black Hole Quencher-3— Пример 5′: BHQ3/ACGTACGT |
5′/3′ | 13 | 612 |
от 98 ₽
|
| 5 |
MGBMGB гаситель |
minor groove binding— Пример 3′: ACGTACGT/MGB |
3′ | — | 831 |
от 1 145 ₽
|
| 6 |
RTQ1RTQ1 гаситель |
Real Time Quencher-1— Пример 5′: RTQ1/ACGTACGT |
5′/3′ | 8 | 660 |
от 98 ₽
|
| 7 |
T-BHQ1BHQ1 гаситель |
Black Hole Quencher-1 - внутр. dT<p><a class="float-start me-3" data-fancybox="filemanager" href="https://t.syntol-npk.ru/image/catalog/oligonucleotides/modifications/BHQ-2-dT.png"><img alt="" class… Пример внутри: AC(T-BHQ1)GTAC |
T | 30 | 955 |
от 240 ₽
|
| 8 |
T-BHQ2BHQ2 гаситель |
Black Hole Quencher-2 - внутр. dT— Пример внутри: AC(T-BHQ2)GTAC |
T | 26 | 957 |
от 240 ₽
|
| Без группы | ||||||
| 9 |
SH гаситель |
Тио— Пример 3′: ACGTACGT/SH |
3′ | — | 322 |
от 51 ₽
|
Следующий шаг
Используйте каталог как справочник, а окончательную конструкцию задайте в редакторе.
Каталог, лабораторные расчёты, олиго и помощь по НАНОФОР 05 в одном диалоге.
Опишите лабораторную задачу обычными словами. Я подключу подходящий проверенный инструмент СИНТОЛ.
Критические процедуры остаются привязаны к утверждённым данным и справочникам.